बोझिल पीसीआर प्रोटोकॉल से निराश? बहुमूल्य नमूना मात्रा से सीमित?वैज्ञानिक समुदाय अब मल्टीप्लेक्स रीयल-टाइम पीसीआर तकनीक को अपना रहा है। यह एक सफलता है जो पारंपरिक पीसीआर की अक्षमताओं को समाप्त करती है जबकि अभूतपूर्व प्रयोगात्मक थ्रूपुट प्रदान करती है।.
आणविक कॉपी मशीन: एमआरएनए से एम्प्लिकॉन्स तक
इसके मूल में, पॉलीमेरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) जीव विज्ञान के फोटोकॉपीयर के रूप में कार्य करता है जो घंटों के भीतर लक्ष्य डीएनए अनुक्रमों को तेजी से बढ़ाता है।प्रक्रिया आमतौर पर जैविक नमूनों से एमआरएनए निष्कर्षण के साथ शुरू होती है, इसके बाद अधिक स्थिर पूरक डीएनए (सीडीएनए) में रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन होता है। यह सीडीएनए फिर तीन चक्रगत चरणों के माध्यम से पीसीआर प्रवर्धन के लिए टेम्पलेट बन जाता हैः
पारंपरिक पीसीआर अंत बिंदु विश्लेषण के लिए जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस पर निर्भर करता है, जबकि इसके उन्नत उत्तराधिकारी वास्तविक समय पीसीआर प्रवर्धन के दौरान निरंतर फ्लोरोसेंस निगरानी शुरू करता है।
मात्रात्मक सफलताः वास्तविक समय पीसीआर गतिशीलता
रीयल-टाइम पीसीआर (क्यूआरटी-पीसीआर) ने फ्लोरोसेंस डिटेक्शन के माध्यम से एम्पलीफिकेशन और एक साथ क्वांटिफिकेशन दोनों को सक्षम करके न्यूक्लिक एसिड विश्लेषण में क्रांति ला दी। दो मुख्य पद्धति यह प्राप्त करती हैः
यह तकनीक सूक्ष्मजीव रोगजनन अध्ययन और मौलिक सूक्ष्मजीव विज्ञान अनुसंधान के लिए अपरिहार्य हो गई है।या तो पूर्ण मात्रा (आणविक प्रतियां) या संदर्भ जीन के खिलाफ सापेक्ष माप प्रदान करना.
मल्टीप्लेक्स पीसीआरः आणविक विश्लेषण के लिए समानांतर प्रसंस्करण
मल्टीप्लेक्स पीसीआर एक विकासवादी छलांग का प्रतिनिधित्व करता है, जो सावधानीपूर्वक डिजाइन किए गए प्राइमर सेट के माध्यम से कई लक्ष्यों के एक साथ प्रवर्धन को सक्षम करता है। इस दृष्टिकोण से चार प्रमुख लाभ प्राप्त होते हैंः
हालांकि, सभी लक्ष्यों में समान प्रवर्धन दक्षता सुनिश्चित करने के लिए प्रतिक्रिया परिस्थितियों के सावधानीपूर्वक अनुकूलन की आवश्यकता होती है।और बफर संरचना.
शिखरः मल्टीप्लेक्स रीयल टाइम पीसीआर
मल्टीप्लेक्स पीसीआर की समानांतर प्रसंस्करण को वास्तविक समय में पीसीआर की मात्रात्मक क्षमताओं के साथ एकीकृत करके, शोधकर्ताओं को उच्च-थ्रूपुट जीनोमिक विश्लेषण के लिए एक अद्वितीय उपकरण मिलता है।संयुक्त प्रौद्योगिकी प्रदान करता है:
तकनीकी बाधाएं बनी हुई हैं, विशेष रूप से फ्लोरोसेंट रिपोर्टरों के बीच स्पेक्ट्रल ओवरलैप में। उन्नत उपकरण और विशेष रंग रसायन अब सिग्नल डीकोनवॉल्यूशन की अनुमति देते हैं,प्रति प्रतिक्रिया दर्जनों लक्ष्यों तक की सटीक मात्रात्मक गणना की अनुमति देता है.
जैविक विषयों में अनुप्रयोग
1988 में अपनी शुरुआत के बाद से, मल्टीप्लेक्स पीसीआर ने कई क्षेत्रों को बदल दिया हैः
अनुकूलन के लिए आवश्यक बातें
सफल कार्यान्वयन के लिए पांच महत्वपूर्ण मापदंडों पर सावधानीपूर्वक ध्यान देने की आवश्यकता हैः
भविष्य के क्षितिज
प्रौद्योगिकी का प्रक्षेपवक्र विस्तारित नैदानिक निदान (एंटीमाइक्रोबियल प्रतिरोध प्रोफाइलिंग सहित), खाद्य सुरक्षा प्रोटोकॉल में सुधार और उन्नत पर्यावरणीय निगरानी प्रणालियों की ओर इशारा करता है।कम्प्यूटेशनल डिजाइन औजारों और बेहतर अभिकर्मक प्रणालियों के माध्यम से अनुकूलन बाधाओं को कम करने के रूप में, मल्टीप्लेक्स रीयल टाइम पीसीआर उच्च दक्षता वाले आणविक विश्लेषण के लिए स्वर्ण मानक बनने के लिए तैयार है।
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