एंटेरोहेमोरेजिक एश्चेरिचिया कोलाई ईएचईसी का पता लगाने के लिए खाद्य सुरक्षा रैपिड टेस्ट किट, फ्रीज-ड्राइड रियल-टाइम पीसीआर अभिकर्मक के साथ, कोई कोल्ड चेन आवश्यक नहीं

1.विवरण

एन्ट्रोहेमोरैजिक एस्चेरीचिया कोलाई(EHEC) एक समूह हैई. कोलाईमनुष्यों में रक्तस्रावी दस्त और एंटेराइटिस पैदा करने में सक्षम उपभेद, जिसमें सेरोटाइप O157:H7 सबसे अधिक प्रतिनिधि उपभेद है। खाद्य संक्रमों में दूषित स्रोतों में गोमांस,कच्चा दूध, पोल्ट्री और इसके उत्पाद, साथ ही फल और सब्जियां, जिसमें गोमांस मुख्य संचरण वाहन है।

यह उत्पाद एक फ्रीज-ड्राइंग रीयल टाइम पीसीआर अभिकर्मक हैके लिए का पता लगानाएस्चेरिचिया कोलाईO157:H7. यह अत्यधिक संरक्षित rfbE जनुकएस्चेरिचिया कोलाईO157:H7 पता लगाने के लक्ष्य के रूप में। यह टेम्पलेट डीएनए को छोड़कर सभी आवश्यक अवयवों वाला मास्टरमिश्रण है, और इसे उपयोग में आसानी के लिए पीसीआर ट्यूबों में एकल परीक्षण के रूप में पूर्व-वितरित किया जाता है।इस उत्पाद को परिवहन और भंडारण के लिए शीत श्रृंखला की आवश्यकता नहीं है, जो शिपिंग लागत को काफी कम करता है, और अभिकर्मक अपशिष्ट और एयरोसोल संदूषण के कारण संभावित नुकसान को समाप्त करता है।

2विनिर्देश और संरचना

3. भंडारण और शेल्फ जीवन

भंडारणपरिवेश के तापमान पर (5-30°C). यह 12 महीने तक स्थिर रहता है. एक बार वैक्यूम पैकेज खोलने के बाद, कृपया अप्रयुक्त उत्पादों को प्रदान किए गए पुनः सील करने योग्य प्लास्टिक बैग में सूखी सामग्री के साथ रखें।औरएल्यूमीनियम पन्नी बैग में। 

सावधानीः 

अभिकर्मक गोली को छोटा होने से संकेत मिलता है कि नली में नमी घुस रही है और अभिकर्मक नम हो गया है।सामान्य से काफी छोटे पेलेट आकार वाले किसी भी अभिकर्मकों को उपयोग से पहले फेंक दिया जाना चाहिए या सकारात्मक नियंत्रण के साथ परीक्षण किया जाना चाहिए नमूना परीक्षण के लिए.

4अतिरिक्त उपकरण और अभिकर्मकों की आवश्यकता है

1)वास्तविक समय पीसीआर उपकरण

2)पिपएटीएसऔर टिप्स

3)न्यूक्लियस-मुक्त जल

4)न्यूक्लिक एसिड निकासी किट

5. संगत वास्तविक समय पीसीआर प्रणाली

एबीआई 7500/फास्ट, रोश लाइटसाइक्लर 480II, बायोराड सीएफएक्स 96, बायोर लाइनजेन 9600.

6. स्वीकार्य नमूने

खाद्य संवर्धन शोरबा, उल्टी, दस्त के नमूने आदि।

7. परिचालन प्रक्रिया

1)नाभिकएसीआईडीईएक्सट्रैक्शन

अर्कडीएनएउचित निकासी किट का उपयोग करके नमूनों से।यह सिफारिश की जाती है किडीएनएलगभग 100μl एलुशन बफर के साथ एलुटेड है(टीई यान्यूक्लेज़ मुक्त एच₂ओ)के अंतिम चरण मेंनिकासी.शुद्ध न्यूक्लिक एसिड को तुरंत इस्तेमाल किया जाना चाहिए या -20°C पर संग्रहीत किया जाना चाहिए।

2)सकारात्मक नियंत्रण की तैयारी

पॉजिटिव कंट्रोल को रिहाइड्रेशन से पहले परिवेश के तापमान पर संग्रहीत किया जा सकता है 12 महीने तक.यहउपयोग से पहले पुनः हाइड्रेट किया जाना चाहिए।जोड़कर250μlटीई बफर या nuclease मुक्तH₂ओ,15 से 20 सेकंड के लिए कम गति से घुमाया और 15 से 20 सेकंड के लिए कम गति से केन्द्रापसारित किया।-20 पर°C.

3)वास्तविक समय पीसीआरएमनवमपीक्षतिपूर्ति

A) वैक्यूम पैकेज खोलें और 8-ट्यूब स्ट्रिप निकालेंsपरीक्षक युक्त. गोली की जाँच ट्यूब के नीचे है (आवश्यकतानुसार ट्यूबों की संख्या में कटौती यदिआवश्यक)यदि प्रदान किए गए ट्यूब आपके उपकरण के साथ संगत नहीं हैं, तो अभिकर्मक गोली को अपने उपकरण के साथ संगत एक ऑप्टिकल ट्यूब में स्थानांतरित करें।

B) ट्यूबों को खोलें और ढक्कन (रियल-टाइम पीसीआर मशीनों के लिए उपयुक्त नहीं) को फेंक दें, और नीचे के रूप में बर्फ पर प्रतिक्रिया मिश्रण तैयार करें।

* न्यूक्लेज़ मुक्त पानी का उपयोग नकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया जा सकता है।

C)वास्तविक समय पीसीआर के लिए उपयुक्त टोपी (स्ट्रिप्स) का उपयोग करके पीसीआर को कैप करें(प्रदान नहीं किया गया)

घ) ट्यूबों को 10 से 15 सेकंड के लिए कम गति से घुमाएं, और 20 सेकंड के लिए 3000 आरपीएम पर सेंट्रिफ्यूज करें और उन्हें वास्तविक समय पीसीआर उपकरण में रखें।

4)आरटी-पीसीआर सेटअप

प्रतिक्रिया मात्रा को 25μl पर सेट करें, और पीसीआर प्रवर्धन प्रक्रिया नीचे दी गई है। 60°C पर फ्लोरोसेंस, और निष्क्रिय संदर्भ के रूप में कोई नहीं चुनें।

5)परिणामएनिदानऔरमैंव्याख्या