उच्च संवेदनशील लिस्टेरिया मोनोसाइटोजेन्स का पता लगाने के लिए फ्रीज-ड्राइड रियल-टाइम पीसीआर डिटेक्शन रिएजेंट, जिसमें कोई कोल्ड चेन की आवश्यकता नहीं है

LyoDt^® फ्रीज-ड्राइड रियल-टाइम पीसीआर के लिए डिटेक्शन रिएजेंट लिस्टेरिया मोनोसाइटोजेन्स

उपयोग’का मैनुअल

1. विवरण

लिस्टेरिया मोनोसाइटोजेन्स, एक ग्राम-पॉजिटिव छोटा बेसिलस, एक ज़ूनोटिक रोगज़नक़ है जो मुख्य रूप से मल-मौखिक मार्ग से फैलता है। इसके अतिरिक्त, यह नेत्र संपर्क या टूटी हुई त्वचा/श्लेष्म झिल्ली के माध्यम से शरीर में प्रवेश कर सकता है। संक्रमण आमतौर पर सेप्टिसीमिया, मेनिन्जाइटिस और मोनोसाइटोसिस के रूप में प्रकट होता है।

यह उत्पाद एक फ्रीज-ड्राइड रियल-टाइम पीसीआर रिएजेंट हैके लिए का पता लगानालिस्टेरिया मोनोसाइटोजेन्स. यह अत्यधिक संरक्षित का उपयोग करता है hlyA जीनलिस्टेरिया मोनोसाइटोजेन्स पहचान लक्ष्य के रूप में। यह एक मास्टरमिक्स है जिसमें टेम्पलेट डीएनए को छोड़कर सभी आवश्यक सामग्री होती है, और इसे आसान उपयोग के लिए पीसीआर ट्यूब में सिंगल-टेस्ट के रूप में पहले से ही वितरित किया जाता है। इस उत्पाद को परिवहन और भंडारण के लिए कोल्ड चेन की आवश्यकता नहीं होती है, जो शिपिंग लागत को काफी कम करता है, और रिएजेंट की बर्बादी और एयरोसोल संदूषण से होने वाले संभावित नुकसान को समाप्त करता है।

2. विनिर्देश और संरचना

3. भंडारण और शेल्फ लाइफ

संग्रहण पर परिवेश का तापमान (5-30°C). यह 12 महीने तक स्थिर रहता है. एक बार वैक्यूम पैकेज खुलने के बाद, कृपया अप्रयुक्त उत्पादों को डेसीकेंट्स के साथ प्रदान किए गए पुन: सीलबंद प्लास्टिक बैग में स्टोर करें, और एल्यूमीनियम पन्नी बैग में। 

सावधानी: 

रिएजेंट की गोली का छोटा होना इस बात का संकेत है कि नमी ट्यूब में रिस रही है और रिएजेंट नम हो गया है। किसी भी रिएजेंट को सामान्य से काफी छोटा आकार होने पर उपयोग करने से पहले सकारात्मक नियंत्रण के साथ त्याग दिया जाना चाहिए या परीक्षण किया जाना चाहिए नमूना परीक्षण के लिए.   

4. अतिरिक्त उपकरण और अभिकर्मक आवश्यक

1) रियल-टाइम पीसीआर उपकरण

2) पिपएट और टिप्स

3) न्यूक्लीज-मुक्त पानी

4) न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण किट

5. संगत रियल-टाइम पीसीआर सिस्टम

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600.

6. स्वीकार्य नमूने

खाद्य संवर्धन शोरबा, वमन, दस्त के नमूने, आदि।

7. संचालन प्रक्रिया

1) न्यूक्लिक एसिड ईएक्सट्रैक्शन

निकालना डीएनए नमूनों से एक उचित निष्कर्षण किट का उपयोग करना। यह अनुशंसा की जाती है कि डीएनए लगभग 100μl एल्यूशन बफर के साथ निकाला जाए (TE या न्यूक्लीज-मुक्त एच₂ओ) निष्कर्षण के अंतिम चरण में निष्कर्षण. शुद्ध न्यूक्लिक एसिड का तुरंत उपयोग किया जाना चाहिए या -20°C पर संग्रहीत किया जाना चाहिए।

2) पॉजिटिव कंट्रोल तैयारी

पॉजिटिव कंट्रोल को पुनर्जलीकरण से पहले परिवेश के तापमान पर संग्रहीत किया जा सकता है 12 महीने तक. यह उपयोग करने से पहले पुनर्जलीकरण किया जाना चाहिए जोड़कर 250 μl TE बफर या nuclease-मुक्त एच₂ओ, कम गति पर 15-20 सेकंड के लिए घुमाया गया, और कम गति पर 15-20 सेकंड के लिए सेंट्रीफ्यूज किया गया। तुरंत उपयोग करें या स्टोर करें -20°C.

3) रियल-टाइम पीसीआर एमआईएक्स पीreparation

ए) वैक्यूम पैकेज खोलें और रिएजेंट युक्त 8-ट्यूब स्ट्रिप निकालेंs निकालें। जांचें कि गोली ट्यूब के तल पर है (आवश्यकतानुसार ट्यूबों की संख्या काटें अगर ज़रूरी). यदि प्रदान की गई ट्यूब आपके उपकरण के साथ संगत नहीं हैं, तो रिएजेंट की गोली को आपके उपकरण के साथ संगत एक ऑप्टिकल ट्यूब में स्थानांतरित करें।

बी) ट्यूब खोलें और टोपी(ओं) को त्याग दें (रियल-टाइम पीसीआर मशीनों के लिए उपयुक्त नहीं), और नीचे के अनुसार बर्फ पर प्रतिक्रिया मिश्रण तैयार करें।

* न्यूक्लीज-मुक्त पानी का उपयोग नकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया जा सकता है।

सी) पीसीआर को कैप्स का उपयोग करके कैप करें (स्ट्रिप्स) जो रियल टाइम पीसीआर के लिए उपयुक्त हैं(प्रदान नहीं किया गया)।

डी) ट्यूबों को कम गति पर 10~15 सेकंड के लिए घुमाएँ, और 20 सेकंड के लिए 3000rpm पर सेंट्रीफ्यूज करें और उन्हें रियल-टाइम पीसीआर उपकरण में रखें।

4) आरटी-पीसीआर सेटअप

प्रतिक्रिया की मात्रा को 25μl के रूप में सेट करें, और पीसीआर प्रवर्धन प्रक्रिया को नीचे के रूप में सेट करें। FAM एकत्र करें 60°C पर प्रतिदीप्ति, और निष्क्रिय संदर्भ के रूप में NONE का चयन करें।

5) परिणाम एनालिसिस और आईnterpretation